KIT PARA EL GENOTIPADO DEL POLIMORFISMO GENÉTICO -250G/A DEL GEN LIPC
Descripción
La implicación del gen LIPC (lipasa hepática) en el desarrollo de arteriosclerosis así como la del polimorfismo común -250G/A localizado en la región promotora está ampliamente descrita en la literatura. El método descrito inicialmente para el genotipado de este polimorfismo está basado en el sistema de PCR-RFLP, o genotipado por PCR y restricción, que es el que se utiliza de forma más común para el análisis individual de la mayoría de los SNPs conocidos. No obstante, estos métodos presentan una serie de inconvenientes que son parcial o completamente solventados por la presente invención, referida a un conjunto de cebadores, sondas, procedimiento y kit para el genotipado de polimorfismos genéticos, y más concretamente para el genotipado del polimorfismo genético -250G/A del gen LIPC. Así, el fundamento básico de la presente invención consiste en una única reacción de PCR en la que se aprovecha la actividad 5’ exonucleasa del enzima Taq polimerasa. En la reacción de PCR están presentes cuatro oligonucleótidos: dos cebadores específicos que flaquean el polimorfismo de interés y dos sondas lineales fluorogénicas, específicas de cada alelo. Estas sondas están marcadas en el extremo 5’ con un fluorocromo de referencia, distinto para cada sonda, y una molécula extintora en el 3’. Cuando las sondas están intactas, la señal emitida por la excitación del fluorocromo de referencia es captada por la molécula extintora, debido a la proximidad física entre ambas, y por tanto no se detecta. La señal fluorescente, diferente para cada alelo, sí se detecta cuando la sonda hibrida con el alelo totalmente complementario y se libera el fluorocromo de referencia, por la actividad 5’?3’ exonucleasa de la polimerasa, durante los ciclos de la reacción de PCR.
Ventajas competitivas
Las principales ventajas de la presente invención son: -Gran rapidez que permite el genotipado a gran escala ya que la reacción de PCR y la detección de la señal fluorescente son simultáneas. -Asignación de genotipos automatizada y obtenible de forma inmediata al finalizar la reacción. -Gran sensibilidad que permite genotipar muestras empleando concentraciones muy bajas de ADN. -Menor riesgo de contaminación al tratarse de un ensayo homogéneo.
Usos y aplicaciones
La presente tecnología tiene su utilidad para el estudio de la variabilidad genética que repercute en la mayoría de las enfermedades comunes, entre otras, la arteriosclerosis, siendo de gran interés para el campo biomédico.
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Áreas
Número de publicación patente
ES2337751
Titulares
Universidad De Málaga
Inventores
Maria Jose Ariza Corbo, José Rioja Villodres, Pedro Manuel Valdivielso Felices, Miguel Angel Sanchez Chaparro, Pedro Gonzalez Santos
Fecha de prioridad
22/07/2008
Nivel de protección: Nacional (España)
Estado de tramitación: Patente concedida a nivel nacional (España)
